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技術(shù)文章
2020-220
關(guān)于細(xì)胞不貼壁的原因：1、胰蛋白酶消化過(guò)度。2、支原體污染。3、培養(yǎng)基pH值過(guò)堿（NaHCO3分解）。4、細(xì)胞老化。5、接種細(xì)胞起始濃度太低或太高。關(guān)于細(xì)胞不貼壁的解決方法：1、縮短胰蛋白酶消化時(shí)間或降低胰蛋白酶濃度。2、分離培養(yǎng)物，檢測(cè)支原體。清潔支架或培養(yǎng)箱。如發(fā)現(xiàn)支原體污染，丟棄培養(yǎng)物。3、使用無(wú)菌醋酸溶液調(diào)整pH值或充入無(wú)菌CO2。4、啟用新的保種細(xì)胞。5、調(diào)節(jié)好接種細(xì)胞濃度。
查看更多2020-219
南美胎牛血清使用方法：在細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中，經(jīng)常加入5%-20%的Gibco胎牛血清，常使用的胎牛血清濃度是10%。高濃度的血清可能改變細(xì)胞的基因表達(dá)譜，影響后續(xù)實(shí)驗(yàn)的結(jié)果，我們?cè)趯?shí)驗(yàn)中使用10%的胎牛血清培養(yǎng)293T細(xì)胞，效果非常好。但是有些細(xì)胞也會(huì)使用5%的Gibco胎牛血清或者20%的Gibco胎牛血清，要根據(jù)具體細(xì)胞選擇合適的胎牛血清濃度。南美胎牛血清作用：1.提供對(duì)維持細(xì)胞指數(shù)生長(zhǎng)的激素，基礎(chǔ)培養(yǎng)基中沒(méi)有或量很少的營(yíng)養(yǎng)物，以及主要的低分子營(yíng)養(yǎng)物。2.提供結(jié)合蛋白，能識(shí)別...
查看更多2020-217
1、收到細(xì)胞后首先觀察T-25瓶是否有損壞、漏液、渾濁等現(xiàn)象，若有上述現(xiàn)象發(fā)生請(qǐng)及時(shí)和我們聯(lián)系。2、瓶中運(yùn)輸?shù)呐囵B(yǎng)液不能重復(fù)使用，請(qǐng)換新鮮培養(yǎng)液培養(yǎng)。3、對(duì)于貼壁細(xì)胞，若大部分細(xì)胞漂浮，置于培養(yǎng)箱隔夜觀察，大部分漂浮細(xì)胞重新貼壁，表明細(xì)胞活力正常，繼續(xù)培養(yǎng)，剩余漂浮的細(xì)胞可以去掉；若大部分細(xì)胞仍然不貼壁，將漂浮的細(xì)胞離心收集，用臺(tái)盼藍(lán)染色鑒定細(xì)胞活力，并與本公司銷售人員及時(shí)聯(lián)系。4、建議客戶收到細(xì)胞后不同倍鏡各拍幾張細(xì)胞的照片，記錄細(xì)胞狀態(tài)，如細(xì)胞狀態(tài)出現(xiàn)問(wèn)題請(qǐng)于一周內(nèi)與本公...
查看更多2020-213
人黑色素瘤貼壁細(xì)胞培養(yǎng)方法如下：1、從手術(shù)室無(wú)菌取腦髓灰質(zhì)或白質(zhì)后，仔細(xì)剝除腦膜、血管和纖維成分，置Hanks液中漂洗一、二次。2、置于30—50倍體積的Hanks液中，此時(shí)腦組織比較柔軟，反復(fù)吹打即制成細(xì)胞懸液。3、把懸液注入離心管室溫中直立5—10分鐘后，細(xì)胞或細(xì)胞團(tuán)快自然下沉，脂肪等雜物易漂浮，可吸除上層、反復(fù)二、三次，即可排除脂肪成分和其它碎塊并獲較多細(xì)胞成分。4、在沉降物中加入適量培養(yǎng)液，通過(guò)紗網(wǎng)成紗布過(guò)濾，計(jì)數(shù)并調(diào)整細(xì)胞密度。5、接入培養(yǎng)瓶或皿中，置5%CO2溫箱...
查看更多2020-210
細(xì)胞培養(yǎng)步驟：1.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：①準(zhǔn)備F-12K培養(yǎng)基（F-12K:GIBCO,貨號(hào)：21127-022);北美胎牛血清，10%;PS1%。②培養(yǎng)條件：氣相：空氣，95%;二氧化碳，5%。溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。③凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲(chǔ)存。2.細(xì)胞處理：①?gòu)?fù)蘇細(xì)胞：將含有l(wèi)mL細(xì)胞懸液的凍存管在37°C水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加l-2mL培養(yǎng)基...
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